PCR für HIV, qualitativ oder quantitativ. PCR-Tests auf HIV: Zuverlässigkeit und Merkmale des Verfahrens. Diagnose von HIV mittels PCR und ELISA: Interpretation, Zuverlässigkeit der Ergebnisse

Eine Reihe sexuell übertragbarer Krankheiten werden mithilfe von ELISA- und PCR-Methoden diagnostiziert.

Bei der Vorbereitung auf die Untersuchung ist es für Patienten nicht ratsam, zwei Tage lang fetthaltige Lebensmittel zu sich zu nehmen. Wie bei einer Blutuntersuchung auf Viren erfolgt die Probenentnahme auf nüchternen Magen; die letzte Mahlzeit liegt spätestens 8 Stunden zurück. Streichen Sie frittierte Lebensmittel und Alkohol aus Ihrer Ernährung. Wenn Sie diese einfachen Anforderungen befolgen, werden Ihre Untersuchungsergebnisse genauer.

Die Liste der erkannten Krankheiten umfasst:

• humanes Papillomavirus (HPV);
• Chlamydien;
• Herpes (ein zusätzlicher Bluttest auf Herpes ist vorgeschrieben);
• Ureaplasma;
• Mykoplasmen;
• Tripper;
• Cytomegalovirus;
• Trichomoniasis;
• Toxoplasmose.

PCR für HIV in der Infektionsdiagnose

Aufgrund der Tatsache, dass keine ausschließlich für eine HIV-Infektion charakteristischen Symptome bekannt sind, ist eine Erkennung einer HIV-Infektion allein aufgrund der Beschwerden des antragstellenden Patienten nicht möglich.

HIV-Tests sind zu einer Notwendigkeit geworden, weil... Die aktuelle öffentliche Meinung zu dieser Krankheit ist, dass AIDS als Todesurteil gilt. Es gab Fälle, in denen eine Person nach unregelmäßigen sexuellen Kontakten verstärkt auf die Signale ihres Körpers achtet und neue Anzeichen einer tödlichen Krankheit findet und oft erfindet.

Die Durchführung von Untersuchungen unter Laborbedingungen ist derzeit die einzige und zuverlässigste Diagnosemöglichkeit (Bluttest auf HIV). Mit der PCR werden folgende Gesundheitsprobleme festgestellt:

• um das Vorhandensein von HIV während des seronegativen Fensters zu bestätigen oder zu widerlegen;
• mit einem fragwürdigen Immunblot-Ergebnis (um eine genaue Beschreibung des pathologischen Prozesses zu erstellen);
• bei der Feststellung des Genotyps von HIV-1 oder HIV-2;
• um die Viruslast des Körpers zu ermitteln und zu überwachen;
• um den HIV-Status bei Neugeborenen zu ermitteln, deren Mütter HIV-Trägerinnen sind;
• während der Bluttransfusion.

Die Überlegenheit der PCR-Methode in der Diagnose Infektionskrankheiten:

Bei der Feststellung, dass die Person, die den Antrag stellt medizinische Versorgung Bei einem Patienten mit positivem Ergebnis einer HIV-Infektion beginnen sie mit der Durchführung eingehenderer Untersuchungen des Patienten, um die Art der Krankheit und ihren Verlauf sowie die Grundlage und Art von Folgeerkrankungen und den Grad der Immunität zu klären und zu klären Schaden.

ELISA- und PCR-Analysen: Forschungsmerkmale, Prinzipien und Interpretation

Zur Analyse wird Blut aus einer Vene entnommen. Während der Schwangerschaft werden unbedingt Blutproben auf AIDS entnommen. Rückschlüsse auf das Fehlen oder Vorhandensein des Immundefizienzvirus im Körper des Patienten werden anhand des Vorhandenseins oder Fehlens von Antikörpern gezogen. Der ELISA sollte nicht unmittelbar nach dem Verdacht auf eine Infektion durchgeführt werden, sondern erst nach einiger Zeit, damit sich im Blut des Patienten Antikörper bilden. Es verschwindet aus verschiedenen Gründen nach 3 Wochen bis 3 Monaten.

Darüber hinaus zeigte sich, dass das ELISA-Ergebnis sowohl falsch positiv als auch falsch negativ sein kann. Bei der Diagnose eines Infektionsverdachts sehr früh, wenn noch keine Antikörper gegen HIV aufgetreten sind, erhält man ein falsch negatives Ergebnis. In solchen Fällen müssen Sie zur Abklärung das Blut nach 1-3 Monaten erneut auf HIV testen.

Ein falsch positives Ergebnis kann dagegen erhalten werden, wenn der Patient neben den aufgeführten auch an chronischen Infektionen, Krebs oder Autoimmunerkrankungen leidet. Abweichungen von der Norm sind in anderen Situationen möglich. Daher wird bei einem positiven ELISA-Ergebnis selbstverständlich eine erneute Überprüfung mit den empfindlichsten Methoden durchgeführt.

Die PCR-Diagnostik ist eine der derzeit modernsten Forschungsmethoden und wird häufig zur Identifizierung von Infektionskrankheiten eingesetzt. Die DNA-Diagnostik umfasst mehrere auf verschiedene Weise Die beliebteste Methode zur Durchführung von Forschungsarbeiten ist heute die Polymerase-Kettenreaktion oder PCR.

Diese Methode basiert darauf, einen kleinen Teil der DNA des Erregers einer bestimmten Infektion in Geweben für Mikrostudien zu finden. In diesem Fall enthält ein kleiner Teil der DNA bis zu mehrere hundert DNA-Paare, die streng geordnet sind.

Die PCR-Methode ist die genaueste; mit ihr lässt sich das Vorhandensein eines Virus feststellen, unabhängig davon, ob Antikörper auftreten oder nicht. Trotz ihrer Genauigkeit weist die Methode jedoch einen gravierenden Nachteil auf, der genau auf ihre erhöhte Genauigkeit zurückzuführen ist. Es besteht eine ziemlich hohe Wahrscheinlichkeit, dass das Ergebnis falsch ist. Daher werden im Zusammenhang mit dieser Methode und darüber hinaus weitere Methoden zum Nachweis genetischer und antigener Materialien eingesetzt.

Die Essenz der Hepatitis-Diagnose mittels PCR

Es gibt fünf nachgewiesene Viren, die Lebererkrankungen verursachen. Dies sind die bekannten Hepatitisviren A, B, C, D, E. In sehr seltenen Fällen wird Hepatitis durch das Epstein-Barr-Virus verursacht, bei dem es sich eigentlich um eine Art Herpes handelt. Bei den aufgeführten Viren handelt es sich um Vertreter verschiedener Familien, was sich je nach Art der Hepatitis auf deren Behandlung auswirkt.

PCR (Polymerase-Kettenreaktion) ist eine Methode der Molekulargenetik, mit der Sie jede kurze Sequenz von DNA (oder RNA) auch in Proben analysieren können, die nur geringe Mengen an DNA oder RNA enthalten, und so das Vorhandensein/Fehlen eines pathogenen Krankheitserregers (bis) bestimmen um beispielsweise festzustellen, ob beim Menschen HIV oder das Hepatitis-B-Virus oder Mycobacterium tuberculosis vorliegt). PCR wird verwendet, um ausgewählte DNA- oder RNA-Abschnitte für die Analyse zu reproduzieren/vermehren/klonieren (amplifizieren).

Die PCR-Methode ist so einfach, dass sogar ein Schulkind damit umgehen kann)

Bisher umfasste die DNA-Amplifikation das Klonen relevanter Segmente in bakterielle Expressionsvektoren und dauerte Wochen. Aber jetzt, wo die PCR in Reagenzgläsern durchgeführt wird, es dauert nur ein paar Stunden. PCR ist hocheffizient, so dass eine große Anzahl von Kopien von DNA erstellt werden kann.

DNA-Sequenz und Nukleotidkorrespondenz.

Möge die Hand des Gebers niemals versagen

Projekt „AIDS.HIV.STD.“ ist eine gemeinnützige Organisation, die von ehrenamtlichen HIV/AIDS-Experten auf eigene Kosten gegründet wurde, um den Menschen die Wahrheit zu bringen und ihnen vor ihrem beruflichen Gewissen Klarheit zu verschaffen. Für jede Hilfe zum Projekt sind wir dankbar. Möge es dir tausendfach belohnt werden: SPENDEN .

Darüber hinaus verwendet die PCR dieselben Moleküle, die die Natur zum Kopieren von DNA verwendet:

• Zwei „Primer“, kurze einzelsträngige DNA-Sequenzen, die so synthetisiert werden, dass sie dem Anfang und Ende des zu kopierenden DNA-Abschnitts entsprechen.
• Ein Enzym namens Polymerase, das sich entlang eines DNA-Segments bewegt, seinen Code liest und eine Kopie zusammensetzt.
• Eine Reihe von DNA-Blöcken, die diese Polymerase herstellen muss.

Das heißt, PCR ist eine Technik, bei der DNA-Partikel (manchmal auch RNA) in einer bestimmten Lösung oder auf einer speziellen Oberfläche vermehrt werden, wo sie abgelagert werden können.

PCR ist eine Technik, die es Wissenschaftlern ermöglicht, eine Nadel im Heuhaufen zu finden und dann aus diesen Nadeln einen Heuhaufen zu bauen.

Die Aufgabe der PCR als Methode besteht darin, sie zu vervielfältigen (zu amplifizieren) und so viele Kopien wie möglich anzufertigen, damit festgestellt werden kann, zu wem sie gehören (einer bestimmten Person, einem Tier oder einem pathogenen Organismus), auch wenn dies nur der Fall ist Spuren der Anwesenheit von DNA/RNA.

Allerdings ist die PCR-Amplifikation nur ein Teil des diagnostischen Tests. Nach der Verstärkung die verstärkten Segmente muss mit anderen Nukleotidsegmenten verglichen werden, aber aus einer bekannten Quelle(zum Beispiel eine bestimmte Person, ein bestimmtes Tier oder ein pathogener Organismus). Dieser Vergleich einzigartiger Segmente wird häufig durchgeführt, indem PCR-generierte Nukleotidsequenzen neben bekannten Nukleotidsequenzen von Menschen, Krankheitserregern oder anderen Quellen in einem speziellen Gel platziert werden.

Wenn ein elektrischer Strom durch das Gel fließt, bilden die verschiedenen Nukleotidsequenzen Bänder, die in ihrer Struktur einer „Leiter“ ähneln elektrische Ladung und Molekülgröße. Dies nennt man Gelelektrophorese. Sie wandern zu den gleichen Ebenen im Gel und zeigen so die Identität der Nukleotidsequenzen. Diese Methode ist einer der beliebtesten PCR-Tests im Spätstadium.

Wie funktioniert PCR?

1983 entwickelte Kari Mullis die grundlegenden Schritte zur Amplifikation von DNA-Sequenzen. Er und Michael Smith wurden ausgezeichnet Nobelpreis für die Entwicklung der PCR im Jahr 1993.

Die PCR wird in einem Reagenzglas mit dem entsprechenden durchgeführt Chemikalien und bei bestimmte Temperatur Heizung.

Folgende Reagenzien bzw. Chemikalien werden benötigt:

• Eine Probe, die eine Nukleotidsequenz enthält (aus Blut, Haaren, Eiter, Haut usw.).
• DNA-Primer: Kurze einzelsträngige DNA, die an Nukleotidsequenzen gebunden ist und die Synthese eines komplementären Nukleotidstrangs fördert.
• DNA-Polymerase: Ein Enzym, das, wenn DNA an einen Primer bindet, sich entlang des DNA-Fragments bewegt, DNA-Bausteine ​​hinzufügt, um komplementäre Basenpaare zu bilden, und so die komplementäre Nukleotidkette der DNA synthetisiert (Einführung der hitzestabilen DNA-Polymerase, Taq-Polymerase, abgeleitet). aus hitzebeständigen Bakterien, verbessert die PCR-Fähigkeit deutlich).
• Ein großer Überschuss an DNA-Bausteinen, sogenannten Nukleotiden (Adenin, Thymidin, Cytosin und Guanin, abgekürzt als: A, T, C bzw. G) in Lösung. Wenn diese Blöcke zusammengefügt werden, bilden sie eine Nukleotidsequenz oder einen einzelnen DNA-Strang. Wenn diese Bausteine ​​ihren komplementären Baustein über schwache Wasserstoffbrückenbindungen binden (z. B. bindet A nur an T und G nur an C), entsteht eine komplementäre DNA-Nukleotidsequenz, die mit der ursprünglichen einzelsträngigen DNA verknüpft ist. Wenn die Bindung abgeschlossen ist, entsteht komplementäre doppelsträngige DNA in einer bestimmten Reihenfolge.

Kari Mullis ist ein sehr interessanter, cooler Typ. Schauen Sie sich an, wie interessant er darüber spricht, wie er auf die PCR kam:

Er glaubt an Astrologie, glaubt aber nicht, dass HIV AIDS verursacht.)

Die Polymerase-Kettenreaktion beginnt dann mit einem DNA-Segment aus der Probe, das in ein Röhrchen mit den oben genannten Reagenzien gegeben wird. Die Lösung wird auf 94°C erhitzt. Durch Erhitzen werden die Wasserstoffbrückenbindungen aufgebrochen, die die Bildung komplementärer DNA-Stränge ermöglichen, sodass in der Mischung nur noch Einzelstränge vorhanden sind (dies wird als doppelsträngige DNA-Denaturierung bezeichnet).

Man lässt die Mischung auf 54°C abkühlen. Bei dieser Temperatur binden DNA-Primer und DNA-Polymerase an einzelne einzelsträngige DNA (dies wird als DNA-Annealing bezeichnet). Da die Bausteine ​​in der Mischung im Überschuss (hohe Konzentration) vorliegen, verwendet die Polymerase sie, um neue komplementäre DNA-Stränge zu erzeugen (DNA-Verlängerung genannt), und dieser Prozess läuft bei 72 °C schneller ab. Durch diesen Prozess entsteht aus jedem Einzelstrang des ursprünglichen Moleküls ein neues doppelsträngiges DNA-Molekül.

Dieser Zyklus wird etwa 40 Mal in einer Maschine namens Thermocycler wiederholt, die die Heiz-Kühl-Zyklen automatisch wiederholt und die Menge jeder DNA-Sequenz jedes Mal verdoppelt, wenn der Heiz-Kühl-Zyklus abgeschlossen ist. Was ursprünglich ein kurzer DNA-Abschnitt war, konnte nach 40 Verdopplungszyklen auf etwa 100 Milliarden Kopien erweitert werden.

Wann ist ein PCR-Test erforderlich?

Der PCR-Test ist die Grundlage für eine Reihe von Tests, die viele verschiedene medizinische Fragen beantworten können, die Ärzten bei der Diagnose und Behandlung von Patienten helfen. Das können zum Beispiel PCR-Tests Krankheitserreger erkennen und identifizieren bei Patienten, insbesondere solchen, die schwer zu kultivieren sind (z. B. HIV und andere Viren und einige Pilze).

Einige Ärzte verschreiben PCR-Tests, um die Diagnose zu erleichtern genetische Erkrankungen, während andere Ärzte die PCR verwenden, um biologische Zusammenhänge wie z Identifizierung der Eltern der Kinder. PCR-Tests werden auch zur Identifizierung und Charakterisierung eingesetzt genetische Mutationen und Neuordnungen gefunden bei bestimmten Krebserkrankungen.

PCR-Tests wurden jedoch in vielerlei Hinsicht modifiziert und implementiert wissenschaftliche Forschung, einschließlich Evolutionsbiologie, genetischer Fingerabdruck, Forensik und viele andere.

Was ist RT-PCR?

Reverse Transkriptase-PCR (RT-PCR) ist ein PCR-Test, der zum Nachweis und zur Messung der RNA-Menge entwickelt wurde. Obwohl bei anfänglichen PCR-Tests die DNA amplifiziert wurde, verwenden viele Viren und andere biologische Komponenten (z. B. Mitochondrien) RNA als genetisches Material. RT-PCR unterscheidet sich von der regulären PCR dadurch, dass zunächst RNA entnommen und der RNA-Strang in einen DNA-Strang umgewandelt wird. Dies geschieht im Wesentlichen mit der gleichen PCR-Methode wie oben beschrieben, außer dass anstelle der DNA-Polymerase ein Enzym namens Reverse Transkriptase verwendet wird.

Reverse Transkriptase ermöglicht die Umwandlung eines RNA-Strangs in einen komplementären DNA-Strang. Sobald diese Reaktion stattfindet, kann die routinemäßige PCR-Methode zur Amplifikation der DNA verwendet werden. RT-PCR wird zum Nachweis und zur Untersuchung vieler RNA-Viren verwendet. RT-PCR sollte nicht mit einer anderen PCR-Variante namens Echtzeit-PCR verwechselt werden.

Die Echtzeit-PCR ist eine Variante der PCR, die die Analyse amplifizierter DNA innerhalb der üblichen 40 Zyklen des Verfahrens ermöglicht. Obwohl das Verfahren der herkömmlichen zyklischen PCR ähnelt, werden bei der Echtzeit-PCR Fluoreszenzfarbstoffe verwendet, die an einige der Bausteine ​​oder kleine Nukleotidstränge gebunden sind. Abhängig von der verwendeten Methode tritt bei der Bildung amplifizierter DNA-Stränge Fluoreszenz auf. Die Menge der Fluoreszenz kann über 40 Zyklen gemessen werden und ermöglicht Forschern die Messung spezifischer Produkte und ihrer Mengen während der Amplifikationszyklen.

Dies ermöglicht es Forschern oder Technikern oft, die Gelelektrophorese oder andere sekundäre Verfahren, die zur Analyse von PCR-Produkten erforderlich sind, zu überspringen und so schnellere Ergebnisse zu liefern. Echtzeit-PCR und RT-PCR sind Variationen oder Modifikationen des ursprünglichen PCR-Tests. Es gibt jedoch noch viele weitere Optionen (mindestens 25), die zur Lösung spezifischer Probleme eingesetzt werden. Sie alle haben unterschiedliche Namen wie Assembly-PCR, Hot-Start-PCR, Multiplex-PCR, Solid-State-PCR und viele mehr.

Was ist ein PCR-Test auf HIV?

PCR(Polymerase-Kettenreaktion) – eine Methode zur Vermehrung des genetischen Materials eines Virus, ein Test, der das genetische Material des Virus bestimmt- HIV-RNA oder -DNA.

Ist das Virus in einer minimalen Menge enthalten, erhöht sich diese Menge durch die Reaktion um ein Vielfaches. Daher hat die PCR einen hohen diagnostischen Wert.

Typischerweise wird dieser Test zur Bestimmung verwendet HIV in gespendetem Blut oder zur Früherkennung von HIV im Körper vor der Produktion spezifischer Antikörper gegen HIV. Spezifische Antikörper werden durch herkömmliche HIV-Tests (ELISA) nachgewiesen, allerdings erst 1-3, selten 12 Monate nach der Infektion. A Mithilfe der PCR können Sie nach 14 Tagen eine ziemlich genaue Antwort geben mit 98 %iger Sicherheit und sogar nach 5 Tagen, aber dann liegt die Sicherheit bei 80 %. Daher ist die HIV-PCR ein teurer und arbeitsintensiverer Test als der ELISA Nicht jeder nutzt es, jedoch nur bei besonderen Indikationen (Spender, die einen medizinischen Unfall mit einer HIV-infizierten Person erlitten haben) oder gegen Gebühr.

Qualitativer PCR-Test auf HIV– bestimmt, ob das HIV-1/HIV-2-Virus vorhanden ist oder nicht, bestimmt jedoch nicht die Anzahl der Kopien des Virus (zur Bestimmung der Anzahl wird quantitative PCR verwendet). Eine hochwertige PCR wird NICHT bei Personen durchgeführt, bei denen eine HIV-Infektion bekannt ist. Sein Sie werden nur bei denjenigen durchgeführt, die noch nicht wissen, ob sie mit HIV infiziert sind oder nicht.

Hierbei handelt es sich um eine Methode zur Bestimmung der komplementären DNA-Region im Genom einer von HIV betroffenen Lymphozytenzelle. Diese. Bestimmt wird nicht das Virus selbst, sondern das Material, das das Virus in die Zelle einbaut. Seine DNA wird bereits im Zellkern gespeichert, von dort aus wird sie dann abgelesen und vermehrt (sich selbst kopieren).

Quantitativer PCR-Test für HIV

Quantitative PCR-Analyse für HIV-RNA— bestimmt die Anzahl der Kopien des RNA-Virus im Blut (DNA-PCR dient zur Bestimmung des Virus in Zellen, beispielsweise bei Kindern). Wird nur bei HIV-infizierten Personen durchgeführt, um die Behandlung zu überwachen, die Schwere des Krankheitsprozesses und die Wirksamkeit der Behandlung zu bestimmen.

Wie lange nach der Infektion kann HIV mit der PCR-Methode nachgewiesen werden?

Wie viele Tage später kann ich nach Kontakt mit einem HIV-positiven Partner einen HIV-PCR-Test machen?

HIV kann mittels PCR 4-14 Tage nach der Infektion nachgewiesen werden. Ein negatives PCR-Ergebnis für HIV ist nach 14 Tagen nach Risikokontakt sicher, nach den aktuellen Vorschriften ist jedoch weiterhin eine Testung mithilfe von erforderlich.

Wie unterscheidet sich die DNA-PCR von der HIV-RNA-PCR?

RNA Wird typischerweise in quantitativen Tests verwendet, um die Viruslast bei diagnostizierten Personen zu bestimmen, beispielsweise um die Wirksamkeit einer Therapie zu beurteilen.

DNA- in mononukleären Zellen, beispielsweise zur Diagnose bei Kindern, wo mütterliche Antikörper gegen HIV den Einsatz der ELISA-Methode verhindern.

Beide Tests können sowohl quantitativ als auch qualitativ sein.

Beide können in besonderen Fällen diagnostisch angewendet werden, jedoch unter Berücksichtigung der spezifischen Einschränkungen, die sie auferlegen technische Parameter Systeme, d.h. wie vom Arzt verordnet.

Kann die HIV-PCR falsch positiv sein, Gründe?

Wenn es richtig gemacht wird: Die Krankenschwester hat die Röhrchen nicht vertauscht, vor der Blutabnahme den Pass angeschaut, das Röhrchen richtig beschriftet, die Anweisungen richtig aufgeschrieben usw. und der Laborspezialist (normalerweise ein Laborassistent) hat alles nach den Anweisungen gemacht, er alle Anforderungen der Laborordnung erfüllt (z. B. wurde das Biomaterial korrekt „ausgegraben“, ohne Kreuzkontamination (Kontamination) etc.) und ein hochwertiges Testsystem verwendet wurde, DANN KANN die PCR nur in 2 falsch positiv sein % der Fälle (dies liegt an der Empfindlichkeit der verwendeten Testsysteme) .

Aber wenn dem medizinischen Personal Fehler unterlaufen sind Institutionen DANN kann die PCR in mehr als 2 % der Fälle falsch positiv sein.

Wie wird ein PCR-Test auf HIV durchgeführt?

Für HIV-Tests PCR-Methode Spenden Sie Blut aus einer Vene, vorzugsweise (aber nicht unbedingt) morgens auf nüchternen Magen.

Wo kann ich mich auf HIV PCR testen lassen?

Geben Sie dazu „ Machen Sie einen HIV-PCR-Test“ Fügen Sie der Anfrage Ihren Standort hinzu und Sie werden Organisationen sehen, die sich in Ihrer Region mit PCR-Forschung befassen.

Zum Beispiel,

Wie viel kostet ein PCR-HIV-Test?

Nahe 1,5-3 Tausend Rubel. je nach Region.

Wie zuverlässig sind die Ergebnisse eines PCR-Tests auf HIV?

Durch 14 Tage Nach der Infektion beträgt die Zuverlässigkeit der PCR für HIV 100 %, nach 4-5 Tagen beträgt die Zuverlässigkeit 80 %.

Wie lange dauert die Durchführung eines PCR-Tests auf HIV?

Technisch 4-6 Stunden, aber in Wirklichkeit hängt es von der Organisation des Labors ab und normalerweise wird das Ergebnis innerhalb von 2-3 Tagen vorliegen.

PCR für HIV bei einem Neugeborenen

Da ein Kind unter 1,5 Jahren, das von einer HIV-positiven Mutter geboren wurde, seine Antikörper gegen HIV behält, ist es unmöglich, mithilfe des ELISA festzustellen, ob das Kind mit HIV infiziert ist oder nicht. In dieser Situation wird PCR verwendet:

• Wenn bei einem 1 Monat alten Kind mittels PCR ein Virus nachgewiesen wird, bedeutet dies, dass es sich infiziert hat.
• Wenn ein Kind im Alter von 1-2 Monaten und 4-6 Monaten eine negative PCR aufweist, vorausgesetzt, die Mutter hat es nicht mit ihr gefüttert Muttermilch- Das Kind ist gesund.

Was ist der Unterschied zwischen PCR und ELISA?

PCR bestimmt das Virus selbst und ELISA bestimmt die Reaktion des Körpers (in Form von Antikörpern) auf das Virus.

PCR erkennt das Vorhandensein des Virus schneller als ELISA.

Die HIV-PCR ist eine der häufigsten zuverlässige Methoden diese gefährliche Diagnose für die menschliche Gesundheit und das Leben stellen. Ein Arzt kann allen Personen, die Grund zu der Annahme haben, dass sie mit dem Humanen Immundefizienzvirus infiziert sind, einen Test empfehlen. Patienten fragen sich oft, was das Wesentliche an der Technik ist und welche Vor- und Nachteile sie hat.

Wann und in welchem ​​Zeitraum sollten Sie das Krankenhaus aufsuchen, um Biomaterial zur Forschung einzureichen?

PCR ist ein diagnostischer Ansatz, der in der klinischen Medizin Einzug gehalten hat Molekularbiologie. Von diesem Wissenschaftszweig gelangte die Forschung zur Medizin. Und es wurde aktiv zur Diagnose verschiedener Diagnosen eingesetzt, darunter auch zur Diagnose einer HIV-Infektion.

Jeder weiß, dass jeder lebende Organismus aus DNA und RNA besteht. Die Polymerase-Kettenreaktion basiert auf der Fähigkeit dieser Nukleinsäuren, sich selbst zu replizieren.

Es ist wichtig zu bedenken, dass die PCR in der Lage ist, selbst geringe Konzentrationen viraler Partikel im Blut nachzuweisen. Dies geschieht aufgrund der Tatsache, dass in der biologischen Flüssigkeit „Fragmente“ von Nukleinsäuren zirkulieren, die von speziellen Geräten erfasst und erkannt werden. Dadurch können Sie auch dann eine korrekte Diagnose stellen, wenn die Infektion erst vor Kurzem aufgetreten ist.

Und die Viruspartikel hatten noch keine Zeit, sich im Körper des Patienten zu vermehren. Vom Patienten erhalten biologisches Material in einen speziellen Reaktor gegeben. Am häufigsten wird venöses Blut verwendet.

Spezielle Komponenten, die mit Viruspartikeln interagieren, erhöhen die Anzahl der erkannten Fragmente erheblich. Dadurch werden die Fragmente identifizierbar, sie können beurteilt werden und es können Rückschlüsse auf die Infektion gezogen werden.

Spenden Sie Blut aus einer Vene nach der Standardmethode.

Essen Sie nicht vor dem Arztbesuch; es ist besser, morgens zu kommen. Wenn sich der Patient einer Immunstimulation unterzieht, muss diese zwei Wochen vor dem Test unterbrochen werden.

Vor- und Nachteile der Technik

Wie jede andere Methode zur Diagnose einer bestimmten Krankheit hat auch der PCR-Test eine Reihe von Vor- und Nachteilen. Zu den Vorteilen der Methode gehören:

• geringe Wahrscheinlichkeit, auf ein falsch negatives oder falsch positives Ergebnis zu stoßen;
• die Fähigkeit, nicht nur Blut für Forschungszwecke zu verwenden, sondern auch andere biologische Flüssigkeiten wie Vaginalausfluss, Sperma usw. (wie Ärzte anmerken, kann die Genauigkeit jedoch abnehmen);
• die Fähigkeit, einmal entnommenes Material zur gleichzeitigen Diagnose mehrerer Krankheiten zu verwenden;
• Schnelligkeit der Ergebnisse (wenn die Analyse dringend ist, gehen die Ergebnisse schon am nächsten Tag ein);
• die Fähigkeit, eine Infektion schnell zu diagnostizieren und dementsprechend mit der Behandlung der Krankheit zu beginnen und so die Prognose zu verbessern;
• Keine Altersbeschränkung (die Blutentnahme aus einer Vene kann auch bei einem Neugeborenen durchgeführt werden).

Natürlich hat die PCR auch Nachteile. Dazu gehören:

• der relativ hohe Preis der Studie, insbesondere im Vergleich zu den grundlegenden Screening-Methoden, die in den meisten Krankenhäusern verwendet werden;
• der Bedarf an hochentwickelter Ausrüstung, die zudem teuer ist;
• Es besteht immer noch die Gefahr falscher Ergebnisse, wenn die Analysetechnologie, der Blutentnahmeprozess fehlerhaft ist oder die Person an einer Autoimmunerkrankung, einem Tumor oder einer chronischen Infektionskrankheit leidet.

Selbstverständlich sollte der PCR-Test auf Empfehlung eines Arztes durchgeführt werden.

Der Arzt kann im Einzelfall beurteilen, wie zuverlässig die Ergebnisse sind. Wenn der Arzt dies für erforderlich hält, wird er seinem Patienten anstelle der PCR eine andere Diagnosemethode empfehlen. Oder er ergänzt nach Erhalt der Ergebnisse den diagnostischen Maßnahmenplan um einen Zusatzpunkt.

Viele Patienten sind besorgt über die Frage, ob sich alle Menschen einem PCR-Test auf HIV unterziehen. Tatsächlich ist eine Diagnose nicht für jeden notwendig. Allerdings gibt es Patientengruppen, die gelegentlich Blut zur Analyse spenden müssen.

• Vorläufige Diagnose

• Positiver Immunglobulintest

Immunoblotting, das ergab positives Ergebnis für das humane Immundefizienzvirus muss mittels Polymerase-Kettenreaktion bestätigt werden. Machen Sie dasselbe, wenn zuerst eine PCR durchgeführt wurde. Durch die gegenseitige Ergänzung des Studiums sind Fehler nahezu ausgeschlossen.

• Therapiesteuerung

Patienten mit bestätigtem HIV-Status spenden recht regelmäßig Blut für PCR-Tests. Dies ist notwendig, um den Behandlungsfortschritt zu überwachen und gegebenenfalls die Therapie anzupassen.

• Beurteilung der Blutsicherheit

Jedes gespendete Blut muss mittels Polymerase-Kettenreaktion getestet werden.

Dadurch wird die Übertragung einer HIV-Infektion durch Bluttransfusionen verhindert.

• Beurteilung des Neugeborenenstatus

Wenn ein Kind von einer HIV-positiven Frau geboren wird, muss es sich ebenfalls einer PCR unterziehen. Dies ist notwendig, um den Status des Kindes zu bestimmen und Taktiken für seinen weiteren Umgang zu entwickeln.

Zuverlässigkeit der Studie

Viele Patienten sind besorgt über die Frage, wie zuverlässig die Polymerase-Kettenreaktion ist, wenn sie eine Diagnose des Humanen Immundefizienzvirus planen. Trotz der Tatsache, dass PCR eine der häufigsten ist moderne Techniken, du kannst ihr immer noch nicht einmal 100 % vertrauen.

Heutzutage wird die PCR immer noch nicht als Screening-Methode eingesetzt, gerade weil sie zu falsch positiven Ergebnissen führen kann.

Um dies zu vermeiden, empfehlen Ärzte, sich richtig auf die Sammlung von Biomaterial vorzubereiten, aber selbst die Vorbereitung hilft nicht immer. Beispielsweise kann der Test ein positives Ergebnis liefern, wenn eine Person einen bösartigen Tumor im Körper hat. Wenn er an einer chronischen Infektion oder beispielsweise einem Autoimmunprozess leidet. Trotz der Möglichkeit eines falsch positiven Ergebnisses wird die PCR in der Praxis als eine der zuverlässigsten Methoden eingesetzt.

Um Fehler auszuschließen, empfehlen Ärzte ihren Patienten häufig, den Test bei einem positiven Ergebnis erneut durchzuführen. In manchen Fällen empfiehlt es sich außerdem, zusätzlich eine ELISA-Reaktion und andere Untersuchungen durchzuführen. Die Durchführung einer Reihe von Tests liefert immer ein zuverlässigeres Ergebnis als die Durchführung nur einer Studie.

Wofür kann der Test verwendet werden?

Nicht alle Patienten wissen genau, wofür die Polymerase-Kettenreaktion in der klinischen Praxis eines Arztes eingesetzt wird.

• Es ist notwendig, die Krankheit in der Latenzzeit zu erkennen

Das Immundefizienzvirus kann über einen längeren Zeitraum latent im Körper existieren.

PCR ist der einzige Test, der das Vorhandensein eines Krankheitserregers im Körper anzeigen kann. Auch wenn es noch sehr wenige Viruspartikel gibt.

• Feststellung des Genotyps

Heutzutage wurden mehrere Genotypen der HIV-Infektion identifiziert. Oft ist es wichtig zu bestimmen, welcher spezifische Genotyp eine Person infiziert hat, da davon die Auswahl der antiviralen Medikamente abhängt.

• Bestimmung des Virus und nicht der Antikörper dagegen

Einer der Vorteile der Analyse besteht darin, dass mit der Technik nicht Antikörper gegen Viruspartikel, sondern das Virus selbst nachgewiesen werden können.

Viele Patienten interessieren sich dafür, warum dies von Vorteil ist. Der Punkt ist, dass, wenn der Schwerpunkt auf dem Nachweis des Erregers selbst liegt, die Wahrscheinlichkeit, auf falsch positive Reaktionen aufgrund der Ähnlichkeit verschiedener Antikörper zu stoßen, geringer ist. Wie Ärzte anmerken, war es in vielerlei Hinsicht die Fähigkeit, das Virus selbst und nicht Antikörper nachzuweisen, die die Technik so effektiv machte.

Wann ist es fällig?

Patienten interessieren sich oft für die Frage, wie lange ein Arztbesuch für eine Spende von biologischem Material dauert.

Es hängt alles davon ab, was genau Sie mit der Technik bestimmen möchten.

Es wird empfohlen, nach DNA des humanen Immundefizienzvirus zu suchen, wenn der Verdacht auf eine Infektion besteht und eine frühzeitige Diagnose erforderlich ist. Im Durchschnitt beginnt der Nachweis von DNA im Blut zehn Tage nach der Infektion. Es wird jedoch empfohlen, die Analyse zunächst 4 Wochen nach der Infektion und dann 12 Wochen nach der Infektion mittels ELISA zu bestätigen.

Bestätigt der ELISA die Diagnose, gilt der Status des Patienten als positiv.

Forschung zur Bestimmung von RNA ist immer quantitativ. Es wird empfohlen, wenn der positive Status des Patienten bestätigt ist und eine Behandlung mit einer antiviralen Therapie begonnen wird. Befindet sich viel RNA im Körper, wird die akute Phase der Erkrankung diagnostiziert. Reicht dies nicht aus, gilt die Unterdrückung des Erregers als erfolgreich und die Therapie kann auf eine sanftere umgestellt werden.

• Widerstandsbewertung

Einige HIV-Stämme sind resistent gegen die Medikamente, mit denen sie behandelt werden. Es wird auch eine Studie empfohlen, um die Wahrscheinlichkeit eines Nichtansprechens auf die Behandlung zu beurteilen. Sie wird durchgeführt, wenn nach der Verschreibung der Therapie keine Besserung eintritt. Es wird auch in der akuten Phase des Infektionsprozesses empfohlen.

Das Humane Immundefizienzvirus breitet sich von Jahr zu Jahr aktiver in der menschlichen Bevölkerung aus. Jede Person kann mit einer Pathologie konfrontiert werden, und deshalb ist es manchmal wichtig zu wissen, wie man eine korrekte Diagnose stellt.

PCR – gute Methode Diagnose, wenn sie von einem Arzt richtig angewendet wird. Und das Wichtigste für den Patienten ist, die Empfehlungen des Arztes zur Vorbereitung auf die Studie zu befolgen, die nicht kompliziert sind.

Eine der schwersten und noch nicht geheilten Krankheiten wird durch das Humane Immundefizienzvirus verursacht.

Den Erreger im Körper nachzuweisen, ist nicht einfach: Derzeit werden hierfür nur wenige Forschungsmethoden eingesetzt.

Ein solcher Test ist Polymerase-Kettenreaktion (PCR).

Um die Methode der Polymerase-Kettenreaktion zu verstehen, müssen Sie sich die Strukturmerkmale von Zellen aus der Schule merken.

Beliebig lebende Zelle enthält Protein und zwei Arten von Nukleinsäuren: DNA und RNA. Sie sind die wichtigsten zellulären Strukturen, da sie genetische Informationen auf besondere Weise kodiert enthalten.

Der DNA-Code ist eine strenge Abfolge von Mikrostrukturen, die eine lange Kette bilden.

Referenz! Die Grundlage der PCR ist die Fähigkeit von Nukleinsäuren, sich unabhängig zu vermehren.

Wenn das Virus in gesunde Zellen eindringt, zerstört es DNA-Stränge.

In diesem Fall enthält die Zelle keine vollständigen Ketten mehr, sondern nur noch kleine Fragmente – Nukleotide. Darüber hinaus werden selbst kleinste Partikel des Virus sichtbar.

Auf dem Nachweis beschädigter DNA-Stränge und Zellreste basiert die Methode der Polymerase-Kettenreaktion.

Es gibt zwei Arten der PCR-Diagnostik:

• Hohe Qualität. Geeignet für diejenigen, deren Diagnose nicht bestätigt wurde: Es zeigt lediglich an, ob das Virus in den Zellen vorhanden ist.
• Quantitativ. Der Patient erhält das Ergebnis „Keine virale DNA nachgewiesen“, was bedeutet, dass kein HIV vorhanden ist, oder eine Information über das Vorhandensein des Erregers, was bedeutet, dass die Person mit HIV infiziert ist.

Liegt eine gesicherte Diagnose vor, ist eine quantitative Analyse vorgeschrieben. Es wird verwendet, um die Anzahl der Kopien der RNA (DNA) des Virus im Blut (in den Zellen) zu bestimmen. Quantitative Analyse ermöglicht es Ihnen, die Wirksamkeit der Behandlung bei HIV-infizierten Menschen zu bewerten, die Schwere der Krankheit und ihren Verlauf zu bestimmen.

Welche Diagnosemethoden eine HIV-Infektion erkennen können, wird im Video beschrieben:

Vor- und Nachteile dieser Diagnosemethode

Wie jede diagnostische Maßnahme hat auch die PCR ihre Vor- und Nachteile.

Zu den Vorteilen der Methode gehören:

• Hohe Zuverlässigkeit. Mit der PCR ist es möglich, kleinste Virusreste nachzuweisen; die Wahrscheinlichkeit, den Erreger nachzuweisen, liegt 4-5 Tage nach der Infektion bei 80 %, 14 Tage nach der Infektion bei 100 %. Somit wird die größte Genauigkeit bei der Untersuchung der DNA des Virus in Blutzellen erreicht: Das Virus kann nachgewiesen werden, wenn seine Anzahl 1-5 Kopien pro 1 Million Zellen beträgt.
• Möglichkeit zur Verwendung verschiedener Biomaterialien(Speichel, Urin, Schweiß und Tränen sind für die PCR nicht geeignet, es können jedoch Blut, Sperma und Genitalsekrete von Frauen verwendet werden).
• Möglichkeit der Analyse auf verschiedene Krankheiten anhand einer Probe. Mithilfe der PCR können Sie HIV, Chlamydien, Herpes, Zytomegalievirus, Ureaplasma, Mykoplasmen, Gonorrhoe, Trichomoniasis und Toxoplasmose nachweisen.
• Schnelle Ergebniserzielung. Es gibt einen PCR-Schnelltest, mit dem Sie innerhalb weniger Stunden die Diagnoseergebnisse erfahren können.
• Hohe Empfindlichkeit: PCR hilft, anders als beispielsweise ELISA, den Virusnachweis in den ersten Wochen nach der Infektion.
• Möglichkeit, Ergebnisse innerhalb weniger Tage nach der Infektion zu erhalten. Bei einer Infektion kann das Virus nach 5-14 Tagen nachgewiesen werden, während der ELISA erst nach 6 Wochen durchgeführt werden sollte.
• Keine Altersbeschränkung. Die PCR kann sowohl bei Erwachsenen als auch bei Kindern ab der Geburt durchgeführt werden.

Das Hauptmerkmal der PCR-Analyse besteht darin, dass sie keine Antikörper gegen das Virus, sondern das Virus selbst nachweist.

Den Vorteilen stehen nur wenige Nachteile gegenüber:

• Teuer.
• Die Wahrscheinlichkeit, falsch positive Ergebnisse zu erhalten, liegt bei etwa 20 %. Dies geschieht in der Regel aufgrund eines Verschuldens des Personals (Fehler bei der Sammlung oder dem Transport von Biomaterial, bei der Untersuchung von Biomaterial und der Entschlüsselung der Ergebnisse).
• Die Notwendigkeit, fortschrittliche High-Tech-Geräte zu verwenden, mit denen nur einige Kliniken ausgestattet sind.

Aufmerksamkeit! Offensichtlich hat die Methode weit mehr Vorteile als Nachteile. Besonders wichtig ist, dass es mithilfe der PCR möglich ist, die Krankheit im Anfangsstadium der Entwicklung zu erkennen und rechtzeitig mit der Behandlung zu beginnen.

Das Ergebnis eines PCR-Tests kann bereits 14-21 Tage nach einer möglichen Infektion positiv sein. Wenn der Test jedoch negativ ausfällt, ist dies keine Garantie dafür, dass keine Infektion vorliegt. Es ist besser, nach 2 Wochen einen bestätigenden Honig-ELISA-Test durchzuführen.

Wie der PCR-Test auf HIV durchgeführt wird, erfahren Sie im Video:

Wem ist es zugeordnet?

Bei Verdacht auf HIV wird zunächst eine PCR verordnet. Die Technik kann auch bei der Identifizierung sexuell übertragbarer Krankheiten und Erbkrankheiten hilfreich sein.

Referenz! Die PCR-Diagnostik wird häufig auf Initiative einer Person durchgeführt, die keine Krankheitssymptome zeigt, bei der jedoch die Vermutung und Besorgnis über eine mögliche Ansteckung besteht, beispielsweise nach ungeschütztem Geschlechtsverkehr, einer kürzlich erfolgten Bluttransfusion oder Kontakt mit einem Infizierten Person.

Wer ist sonst noch für die Prüfung vorgesehen?

• Personen, deren ELISA-Test zweimal positiv war. Mithilfe der PCR kann eine definitive Diagnose gestellt werden.
• Spender planen eine Blutspende.
• Personen, bei denen Immunblotting die Diagnose bestätigte. Immunblotting ist eine Methode zur Diagnose von AIDS und wird normalerweise in Verbindung mit PCR durchgeführt.
• Menschen, die wegen einer durch HIV verursachten Krankheit behandelt werden. Mit der PCR können Sie die Wirksamkeit der Therapie beurteilen.
• Neugeborene, deren Mutter HIV-positiv ist (eine Übertragung des Virus erfolgt in etwa 30 % der Fälle). Bereits 2-3 Wochen nach der Geburt lässt sich feststellen, ob eine Infektion vorliegt.

Manche Menschen werden zu präventiven Zwecken getestet, dies geschieht jedoch nicht oft, da die Kosten für PCR-Tests hoch sind.

Wie lange dauert die Analyse und wo kann ich sie durchführen lassen?

Die HIV-PCR-Analyse wird in einer Laborumgebung durchgeführt.

Die Blutabnahme selbst dauert 5-10 Minuten und die Ergebnisse liegen am nächsten Tag vor.

Bei der Wahl der Expressdiagnostik (z. B. im Invitro- oder Hemotest-Labor) dauert die Interpretation der Ergebnisse durch einen Spezialisten nur 2 Stunden.

In Privatkliniken kann die Diagnostik auf Wunsch auch anonym erfolgen. Dazu müssen Sie dies bei einem persönlichen Besuch mitteilen: Jedem Patienten wird eine Seriennummer zugewiesen und er erhält Zugang zu einem persönlichen Konto. Dann kann eine Person die Ergebnisse auch ohne einen zweiten Besuch im Labor erfahren.

Die Zuverlässigkeit der PCR-Testergebnisse wird im Video beschrieben:

Kosten der Studie

PCR-Diagnostik ist nicht billig, da sie eine bestimmte fortschrittliche Ausrüstung sowie spezielle Kenntnisse eines Spezialisten erfordert.

Die Ausrüstung ist nur in einigen medizinischen Labors verfügbar, wodurch die Analyse teuer sein kann.

Die durchschnittlichen Forschungskosten betragen 3000-5000 Rubel. In einigen Regionen übersteigen die Kosten 1500-2000 Rubel nicht.

Da die Möglichkeit falsch positiver und falsch negativer Ergebnisse besteht oder die Anfrage zu früh gestellt wurde (das Virus hat die DNA-Struktur noch nicht beschädigt, ist aber bereits im Körper vorhanden), kann eine Wiederholung des Tests erforderlich sein.

Der hohe Aufwand ist auch darauf zurückzuführen, dass für die Diagnose eine Reihe von Komponenten erforderlich sind:

1. Ein DNA-Segment (Vorlage), das zur Amplifikation bestimmt ist;
2. Zwei Primer;
3. Polymerase ist eine chemisch aktive Komponente, die den Anstieg der Anzahl viraler Partikel exponentiell beschleunigt;
4. Desoxyribonukleosidtriphosphate;
5. Geladene Teilchen aus zweiwertigem Magnesium;
6. Eine spezielle Lösung, in der der Polymerisationsprozess durchgeführt wird. Diese Lösung ist darauf ausgelegt, einen geeigneten Säuregehalt, eine angemessene Salzkonzentration und einen angemessenen Magnesiumgehalt in der Flüssigkeit aufrechtzuerhalten.

Außerdem erfordert die Studie eine kleine Menge Vaseline: Sie enthält Fette und hohe Temperatur kocht, was die zu untersuchende Probe vor Überhitzung schützt.

Analyse durchführen

Zur Analyse eignen sich Blut, Sperma und Vaginalausfluss. In der Regel, Venöses Blut wird häufiger verwendet.

Die Blutentnahme erfolgt morgens auf nüchternen Magen.

Darüber hinaus müssen Sie sich auf die Analyse vorbereiten:

• 2-3 Tage vor der Diagnose sollten fetthaltige Lebensmittel aus der Ernährung ausgeschlossen werden.
• Alkohol ist 1-2 Tage vor der Analyse ausgeschlossen.
• 2 Wochen vor dem Test müssen Sie die Einnahme immunstimulierender Medikamente abbrechen.
• Die letzte Mahlzeit sollte spätestens 8 Stunden vor der Blutspende eingenommen werden.

Bei der Blutentnahme aus einer Vene wird die innere Ellenbogenbeuge mit einer speziellen Lösung behandelt, anschließend durchsticht der Spezialist die Haut, platziert eine Venenspritzennadel und entnimmt die erforderliche Menge Blut. Dann wird die Nadel entfernt, die Stelle erneut mit Alkohol behandelt und dem Patienten ein Wattestäbchen gegeben.

Der Patient muss vorübergehend seinen Arm beugen, um die Blutung zu stoppen. Wenn es einem Menschen gut geht, kann er sofort nach Hause gehen. Bei Schwindel, Übelkeit und Ohnmacht wird ihm Erste Hilfe geleistet.

Der Labortechniker gibt das resultierende Biomaterial in einen sterilen Kolben und schickt es zur Diagnostik. Der Spezialist vermischt das gespaltene biologische Material in einem speziellen Reaktor mit Enzymen, die verschiedene Infektionen synthetisieren.

Befinden sich nur sehr wenige Viruspartikel im Blut, steigt deren Zahl bei der Interaktion mit Enzymen stark an: Die Reagenzien verbinden sich mit der DNA des Virus und vervielfältigen diese.

Die Analyse erfolgt in mehreren Schritten, da die Teilung der Moleküle im geometrischen Verlauf erfolgt. Eine Zelle ergibt 2, 2 ergibt 4 und so weiter.

Wenn wir die Meinungen und Bewertungen von Ärzten analysieren, können wir mit Sicherheit sagen: Derzeit ist die PCR-Diagnostik die genaueste Methode zum Testen auf eine HIV-Infektion.

Referenz! Mithilfe der Analyse ist es möglich, innerhalb weniger Tage nach der Infektion das Vorhandensein des Virus im Körper festzustellen, auch wenn die Anzahl der Virusstrukturen nur 1-5 Einheiten pro Million Zellen beträgt. Wir sollten jedoch die Nachteile der Methode nicht vergessen, beispielsweise die Wahrscheinlichkeit falsch positiver Ergebnisse.

Allerdings bleibt die PCR einer der wenigen Tests, der eine rechtzeitige Diagnose der Erkrankung und den Beginn einer Behandlung ermöglicht.

IN letzten Jahren Die Methode zum Nachweis von HIV-Genmaterial durch Methoden der Replikation (Amplifikation, Reproduktion) spezifischer Gensequenzen, oft zusammengefasst unter dem Namen einer der Varianten dieser Methode „Polymerase-Kettenreaktion“ (PCR), erfreut sich großer Beliebtheit.

Die PCR-Methode (Polymerase-Kettenreaktion) basiert auf einzigartiges Anwesen NK (sowohl DNA als auch RNA) ist die Fähigkeit zur Selbstreproduktion, die in vitro künstlich reproduziert wird. In diesem Fall werden nur streng spezifische NA-Fragmente synthetisiert.

Der ätiologische Faktor einer HIV-Infektion sind die Viren HIV-1 und HIV-2 (Human Immunodeficiency Viruses) aus der Familie der Retroviridae. Die Pathogenese der HIV-Infektion liegt in der Infektion von Zellen mit dem CD-4-Phänotyp durch das Virus, das T-Helferlymphozyten und einigen anderen Zellen des menschlichen Körpers innewohnt. Die direkte zytopathische Wirkung des Immundefizienzvirus auf diese Zellen führt letztendlich zum Tod durch die Aktivierung opportunistischer Infektionen oder die Entstehung von Tumoren.

Die Labordiagnose einer HIV-Infektion erfolgt in drei Richtungen:

serologische Diagnostik Virusmarker mittels Enzymimmunoassay- und Immunblotting-Methoden, die in der Bestimmung von Antigenen und Antikörpern gegen HIV im Blutserum bestehen.

Bestimmung viraler NK(provirale DNA oder RNA) durch PCR, sowohl im Blut als auch in Blutzellen.

Studie zum Immunstatus(quantitative Bestimmung von CD-4-Lymphozyten), die am besten durch Durchflusszytometrie durchgeführt wird.

Besonders hervorzuheben ist die Bedeutung der PCR für die Diagnose einer HIV-Infektion bei Kindern im ersten Lebensjahr. Eine frühzeitige Diagnose einer HIV-Infektion bei Kindern in diesem Alter ist ohne den Einsatz der PCR grundsätzlich nicht möglich. Dies liegt daran, dass ein Kind einer HIV-infizierten Mutter zwangsläufig Antikörper gegen das Immunschwächevirus aufweist. Es ist nicht möglich, zwischen mütterlichen und eigenen Antikörpern gegen HIV zu unterscheiden. Bei einem nicht infizierten Kind werden diese Antikörper unter dem Einfluss des eigenen Immunsystems im Alter von 6 bis 9 Monaten eliminiert, obwohl sie in einigen Fällen bis zu 18 Lebensmonate lang zirkulieren können, jedoch nicht länger als diesen Zeitraum.

Zu beachten ist, dass PCR-Tests nur bei einer Komplettverweigerung sinnvoll sind Stillen Kind von einer HIV-positiven Mutter vom Moment der Geburt an, weil Das Infektionsrisiko ist recht hoch und liegt bei etwa 5 %.

Somit ermöglicht die PCR eine Differenzialdiagnose des HIV-Status bei kleinen Kindern. Liegt also in den ersten 48 Lebensstunden ein positives PCR-Ergebnis für die NK des Immundefizienzvirus vor, liegt eine HIV-Infektion im Mutterleib vor. Wenn das PCR-Ergebnis in den ersten 48 Stunden negativ ist, aber im Alter von 7–14 Tagen positiv wird, dann ist die Infektion intrapartal aufgetreten.

Derzeit ermöglicht die PCR nicht nur die Diagnose, sondern auch die Überwachung der Behandlung einer HIV-Infektion durch Bestimmung der RNA-Konzentration im Plasma sowie die Identifizierung chemotherapieresistenter Stämme des Immundefizienzvirus. Die Bestimmung der „Viruslast“ im Blutplasma ist das beste prognostische Kriterium für den Verlauf einer HIV-Infektion und Beurteilung der Wirksamkeit einer antiretroviralen Therapie.

Bekannte PCR-Modifikationen zur Diagnose einer HIV-Infektion erreichen eine Sensitivität von nur 98 %, d. Aus diesem Grund können sie nicht als Bestätigungstests verwendet werden, da sie offensichtlich mehr falsch negative Ergebnisse liefern als Immunoblots. Die PCR-Technik verhält sich in der Praxis zu „empfindlich“ gegenüber äußeren Schwankungen und führt in ungeschickten Händen und unter unzureichend ausgestatteten Laborbedingungen zu einer beträchtlichen Anzahl unspezifischer (falsch positiver) Reaktionen. Die Spezifität der PCR hängt auch von der Auswahl der darin verwendeten Inhaltsstoffe ab, insbesondere der sogenannten „Primer“, die die „HIV-Gensequenzen“ imitieren sollen, aber nicht immer genau ausgewählt werden können. Eine erfolglose Selektion kann insbesondere dazu führen, dass solche Tests mit unterschiedlichem Erfolg verschiedene Subtypen von HIV-1 nachweisen können, beispielsweise den Subtyp B nachweisen, die Subtypen A und G jedoch nicht nachweisen usw. Allerdings schreitet die Entwicklung dieser Methoden rasant voran und es ist möglich, dass bald bessere Sätze von Standardreagenzien auf den Markt kommen. In der Praxis müssen Ärzte die praktischen Eigenschaften der von ihnen angebotenen diagnostischen Tests berücksichtigen und zunächst davon ausgehen, dass ihr praktischer (praktischer) Wert möglicherweise erheblich geringer ist als der von den Herstellern angegebene.

Der theoretische Vorteil der PCR besteht darin, dass sie eine HIV-Infektion in der Inkubationszeit und in frühen klinischen Phasen nachweisen kann, wenn möglicherweise noch keine Antikörper vorhanden sind. Es ist jedoch noch nicht möglich, infizierte Personen später im Infektionszeitraum immer wieder zu identifizieren. In Zukunft könnte dies auch wichtig sein, wenn versucht wird, eine HIV-Infektion bei Menschen zu diagnostizieren, die eine antiretrovirale Therapie erhalten, wenn der HIV-Spiegel im Blut deutlich abnimmt. Der kombinierte Einsatz zweier Methoden, die einen Ausweg aus dieser Situation darstellen könnten – ELISA und PCR – wird die Forschung leider deutlich verteuern, insbesondere wenn sie im Massenmaßstab durchgeführt wird.

HIV-Nachweis mittels PCR-Methode im Blut ist in zwei Varianten möglich:

Nachweis von HIV-Provirus-DNA in mononukleären Zellen des peripheren Blutes;

Nachweis von HIV-RNA in Körperflüssigkeiten (zum Beispiel Plasma oder Serum).

Jetzt PCR für HIV-Provirus-DNA Wird als diagnostische Technik zur direkten Diagnose einer HIV-Infektion in den folgenden Fällen eingesetzt:

Während des serologischen „Fensters“. Obwohl Sie daran denken sollten! dass die Sensitivität der PCR für HIV-Provirus-DNA zwischen 96 und 99 % liegt und die PCR daher trotz hoher Sensitivitätsraten entweder in Verbindung mit ELISA oder mit anschließender Bestätigung durch ELISA durchgeführt werden sollte;

Im Falle eines fraglichen IS-Ergebnisses;

Bei der Untersuchung von Kindern, die von HIV-infizierten Müttern geboren wurden. Der Einsatz der PCR ermöglicht es in diesem Fall, die für die Diagnose einer HIV-Infektion erforderliche Zeit von 18 Monaten auf 3-6 Monate zu verkürzen.